摘要：目的:建立能同時(shí)檢測(cè)糞便中溶組織內(nèi)阿米巴、迪斯帕內(nèi)阿米巴和莫氏內(nèi)阿米巴原蟲(chóng)的巢式多重PCR方法;方法:根據(jù)溶組織內(nèi)阿米巴、迪斯帕內(nèi)阿米巴和莫氏內(nèi)阿米巴原蟲(chóng)16S rDNA基因序列,設(shè)計(jì)1對(duì)阿米巴屬原蟲(chóng)保守引物和3對(duì)不同內(nèi)阿米巴原蟲(chóng)特異性引物,通過(guò)反應(yīng)體系優(yōu)化及特異性、敏感性等建立了巢式多重PCR方法,并對(duì)部分臨床樣本進(jìn)行了檢測(cè);結(jié)果:該巢式多重PCR方法能特異性擴(kuò)增溶組織內(nèi)阿米巴、迪斯帕內(nèi)阿米巴和莫氏內(nèi)阿米巴原蟲(chóng)目的片段,特異條帶大小分別為439、174、553 bp,區(qū)分明顯;該方法可檢測(cè)糞便樣品中阿米巴原蟲(chóng)滋養(yǎng)體的最小值約為20個(gè),在固定其它兩種內(nèi)阿米巴原蟲(chóng)滋養(yǎng)體細(xì)胞數(shù)量的情況下,該方法最低能分別檢測(cè)到0.01個(gè)E.histolytica、1個(gè)E.dispar和0.1個(gè)E.moshkovskii滋養(yǎng)體。臨床樣本的檢測(cè)也顯示巢式多重PCR方法與單一PCR具有較高的一致性。結(jié)論:巢式多重PCR方法具有高度的特異性和敏感性,其在溶組織內(nèi)阿米巴、迪斯帕內(nèi)阿米巴和莫氏內(nèi)阿米巴原蟲(chóng)的診斷和流行病學(xué)調(diào)查中具有重要的應(yīng)用價(jià)值。