鮰愛德華菌T6SS eivpP基因缺失突變株的構(gòu)建
作者：郭羿; 楊曉宇; 倪萍; 王一婷; 郭思聰; 馬紅麗; 趙小然; 葉仕根 大連海洋大學(xué)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部北方海水增養(yǎng)殖重點實驗室; 大連市海珍品疾病防控重點實驗室; 遼寧大連116023
摘要：為研究鮰愛德華菌Edwardsiella ictaluriⅥ型分泌系統(tǒng)(T6SS)EivpP與其他分泌蛋白之間的相互作用及其在細菌致病過程中的作用機制,在克隆到eivpP基因上、下游同源臂的基礎(chǔ)上,采用融合PCR技術(shù)制備了eivpP基因缺失用的融合片段,并成功克隆到自殺質(zhì)粒pDM4內(nèi),再將重組自殺質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌S17-1λ(pir)中,與鮰愛德華菌野生菌株ATCC33202共培養(yǎng)。經(jīng)同源重組和蔗糖負篩獲得鮰愛德華菌eivpP基因缺失突變陽性克隆,經(jīng)PCR鑒定結(jié)果顯示,突變株未檢測出eivpP基因,即eivpP基因徹底敲除成功。本試驗結(jié)果可為研究eivpP基因在鮰愛德華菌致病過程中的作用機制提供數(shù)據(jù)資料,為鮰愛德華菌弱毒疫苗的研發(fā)提供理論依據(jù)。
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