摘要：構(gòu)建了T7啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)杜仲幾丁質(zhì)酶基因EuCHIT1的原核表達(dá)載體pET-EuCHIT1和pMCSG-EuCHIT1,其表達(dá)產(chǎn)物分別含6個(gè)組氨酸(6His)標(biāo)簽和6個(gè)組氨酸連接的麥芽糖結(jié)合蛋白(his6-tag–maltose-binding protein,MBP)標(biāo)簽,分別將重組載體遺傳轉(zhuǎn)化大腸桿菌細(xì)胞BL21(DE3),在37℃、150 rpm條件下培養(yǎng)至菌液OD值為0.4~0.8后,轉(zhuǎn)到16℃、150 rpm條件下以1 m MIPTG誘導(dǎo)培養(yǎng)12 h,表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE分析,p ET-EuCHIT1/BL21(DE3)表達(dá)以包涵體形式存在36.03 kD融合蛋白,pMCSG-EuCHIT1/BL21(DE3)成功表達(dá)可溶形式存在的77.21 kD融合蛋白。故可以使用pMCSG-EuCHIT1/BL21(DE3)獲得可溶的融合蛋白,為之后的EuCHIT1的多克隆抗體的制備和及功能研究奠定基礎(chǔ)。