摘要：為了探討薺菜PIN1基因的生物學(xué)功能,根據(jù)Gen Bank中擬南芥PIN1氨基酸序列,設(shè)計(jì)同源引物,通過(guò)RT-PCR技術(shù),克隆了薺菜PIN1基因(CbPIN1)編碼區(qū)c DNA序列;生物信息學(xué)方法分析了薺菜PIN1蛋白結(jié)構(gòu)特征,并進(jìn)行了亞細(xì)胞定位與原核表達(dá);熒光定量PCR方法檢測(cè)了PIN1組織表達(dá)特性;構(gòu)建了植物表達(dá)載體p BI121-CbPIN1,并獲得轉(zhuǎn)基因植株。結(jié)果表明,CbPIN1 c DNA序列全長(zhǎng)1 869 bp,C+G含量為49%。Blast比對(duì)結(jié)果顯示,CbPIN1與擬南芥PIN1基因高度同源,相似性高達(dá)93%。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn),CbPIN1可編碼1條622個(gè)氨基酸的多肽,CbPIN1蛋白分子質(zhì)量為67. 05 ku,等電點(diǎn)為9. 02,堿性氨基酸(K、R)個(gè)數(shù)為49,酸性氨基酸(D、E)個(gè)數(shù)為42,疏水氨基酸(A、I、L、F、W、V)個(gè)數(shù)為241,極性氨基酸(N、C、Q、S、T、Y)個(gè)數(shù)為157。CbPIN1屬于跨膜蛋白,含12個(gè)絲氨酸磷酸化位點(diǎn),1個(gè)蘇氨酸磷酸化位點(diǎn)。亞細(xì)胞定位結(jié)果顯示,CbPIN1定位于細(xì)胞膜;CbPIN1在薺菜不同組織均有表達(dá),其中,根中表達(dá)最高,種子中表達(dá)最低。原核表達(dá)顯示CbPIN1蛋白大小87. 05 ku。過(guò)表達(dá)薺菜植株中CbPIN1基因表達(dá)量均顯著增加。試驗(yàn)結(jié)果為進(jìn)一步分析CbPIN1在薺菜器官發(fā)育中的作用奠定了基礎(chǔ)。