摘要：目的：利用親和純化技術(shù)聯(lián)合質(zhì)譜分析篩選鑒定與S100A8和S100A9相互作用的蛋白,為探討S100A8和S100A9在結(jié)腸炎相關(guān)性結(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制提供線索。方法：構(gòu)建含有S100A8和S100A9 CDS區(qū)和Flag親和標(biāo)簽的真核表達(dá)載體p3×Flag-CMV-S100A8和p3×Flag-CMV-S100A9,將其轉(zhuǎn)染至HEK293細(xì)胞中,48 h后收集蛋白。運(yùn)用標(biāo)簽分離純化S100A8和S100A9蛋白,液相質(zhì)譜/質(zhì)譜分析技術(shù)（liquid chromatography mass spectrometry/mass spectrometry,LC-MS/MS）鑒定S100A8和S100A9的相互作用蛋白,通過(guò)生物信息學(xué)的方法（GO分析）歸納分析相互作用蛋白,免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)鑒定S100A8和S100A9的相互作用蛋白。結(jié)果：通過(guò)標(biāo)簽純化聯(lián)合質(zhì)譜分析成功鑒定出PKM,NPM1,e IF5A等14個(gè)與S100A8相互作用的蛋白,鑒定出14-3-3ε,PKM等6個(gè)與S100A9相互作用的蛋白。對(duì)所鑒定的相互作用蛋白進(jìn)行生物信息學(xué)分析,發(fā)現(xiàn)與S100A8和S100A9相互作用的蛋白參與糖代謝、細(xì)胞黏附、正向調(diào)控NF-κB轉(zhuǎn)錄因子活性、抗凋亡等在內(nèi)的生物信號(hào)通路,并利用免疫共沉淀證實(shí)PKM2與S100A8和S100A9發(fā)生相互作用,14-3-3ε與S100A9發(fā)生相互作用。結(jié)論：利用免疫共沉淀結(jié)合質(zhì)譜技術(shù)篩選鑒定的S100A8和S100A9相互作用蛋白PKM2和14-3-3ε,可能為闡明S100A8和S100A9在結(jié)腸炎相關(guān)性結(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制提供重要線索。