摘要：目的建立穩(wěn)定過表達(dá)生物鐘蛋白CRY1的人胃癌細(xì)胞系,并檢測CRY1過表達(dá)對細(xì)胞內(nèi)cAMP生成造成的影響。方法克隆CRY1基因,構(gòu)建出過表達(dá)CRY1基因的慢病毒穿梭質(zhì)粒。制備并濃縮過表達(dá)CRY1的慢病毒顆粒,用其感染人胃癌HGC-27細(xì)胞,篩選獲得穩(wěn)定過表達(dá)CRY1的細(xì)胞系。對過表達(dá)CRY1的細(xì)胞及未過表達(dá)的對照組細(xì)胞給予異丙腎上腺素(isoproterenol,ISO)刺激,檢測兩組細(xì)胞內(nèi)c AMP含量的變化的差異。結(jié)果成功構(gòu)建過表達(dá)生物鐘蛋白CRY1的人胃癌細(xì)胞系。Real-Time RT-PCR結(jié)果顯示,相對于對照組,過表達(dá)組細(xì)胞內(nèi)CRY1 mRNA表達(dá)量高出約64倍。Western blotting結(jié)果顯示,相對于對照組,過表達(dá)組細(xì)胞內(nèi)CRY1蛋白表達(dá)量高出近4倍。在受到ISO刺激后,過表達(dá)組細(xì)胞的c AMP的生成量相對于對照組明顯較少。結(jié)論在人胃癌HGC-27細(xì)胞中過表達(dá)生物鐘蛋白CRY1,顯著抑制了ISO刺激下細(xì)胞內(nèi)cAMP的生成。