摘要：脂酰輔酶A還原酶(FAR)可將脂酰輔酶A還原為相應(yīng)的脂肪醇,在白蠟生物合成中起至關(guān)重要的作用。本研究通過cDNA末端快速擴增技術(shù)獲得白蠟蟲Ericerus pela far3基因cDNA全長,其開放閱讀框(ORF)1 566 bp。對白蠟蟲FAR3編碼蛋白進行系統(tǒng)發(fā)育分析,發(fā)現(xiàn)FAR3與人類Homo sapiens、小鼠Mus musculus、黑腹果蠅Drosophila melanogaster等物種的FAR聚為一支;成功構(gòu)建pET-30a eGFP/EpelFAR3原核表達(dá)質(zhì)粒,轉(zhuǎn)入大腸桿菌Escherichia coli BL21感受態(tài)細(xì)胞,在濃度為0.05 mmol·L^-1的異丙基硫代半乳糖苷誘導(dǎo)6 h后有較高的蛋白表達(dá)量;經(jīng)Western blot驗證,表達(dá)蛋白分子量與預(yù)估蛋白分子量符合;質(zhì)譜分析蛋白質(zhì)分值為3 900,肽段覆蓋度74%,所得肽段與理論序列相符;利用底物C24脂酰輔酶A、C26脂酰輔酶A、C28脂酰輔酶A和C30脂酰輔酶A對原核表達(dá)蛋白進行活性分析,利用氣相色譜進行蛋白活性驗證,沒有理論產(chǎn)物相應(yīng)脂肪醇的生成。本研究中白蠟蟲far3 cDNA ORF的獲得及原核表達(dá)的實現(xiàn),為進一步的功能和組織表達(dá)定位研究奠定了基礎(chǔ)。