利用CRISPR/Cas9技術(shù)構(gòu)建環(huán)指蛋白126基因敲除小鼠
摘要：目的利用CRISPR/Cas9技術(shù),獲得環(huán)指蛋白126(RNF126)基因敲除小鼠模型。方法針對C57BL/6小鼠Rnf126基因的第四外顯子設(shè)計敲除引物,構(gòu)建sgRNA重組表達(dá)載體。通過體外轉(zhuǎn)錄獲得sgRNA及Cas9 mRNA,并以顯微注射的方式將RNA導(dǎo)入到C57BL/6小鼠的受精卵中,通過胚胎移植至代孕母鼠。獲得子代工程鼠后,用PCR對其進(jìn)行鑒定。結(jié)果成功獲得針對鼠Rnf126基因的sgRNA以及Cas9 mRNA;通過顯微注射獲得了82枚狀態(tài)良好的受精卵并成功移植至3只代孕母鼠體內(nèi);獲得了11只F0代仔鼠,鑒定后選擇一只單鏈缺失62個堿基的陽性鼠進(jìn)行擴(kuò)繁并在F1、F2代檢測到該突變。結(jié)論成功構(gòu)建Rnf126基因敲除C57BL/6小鼠,該模型可用于RNF126基因及其表達(dá)產(chǎn)物的生物學(xué)功能研究。
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實(shí)驗(yàn)動物與比較醫(yī)學(xué)雜志
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