摘要：目的建立樹(shù)鼩脊髓來(lái)源的星形膠質(zhì)細(xì)胞的體外分離、鑒定方法以及原代培養(yǎng)技術(shù)。為體外利用樹(shù)鼩星形膠質(zhì)細(xì)胞開(kāi)展相關(guān)研究提供實(shí)驗(yàn)材料。方法給新生樹(shù)鼩實(shí)施安死術(shù)后采集脊髓組織,于解剖顯微鏡下去除脊髓膜和血管,減少成纖維細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞和紅細(xì)胞的影響,然后使用胰蛋白酶和DNaseⅠ聯(lián)合消化眷髓組織,分離培養(yǎng)。根據(jù)星形膠質(zhì)細(xì)胞和成纖維細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞的貼壁時(shí)間差異,使用差速貼壁法去除成纖維細(xì)胞;然后在細(xì)胞鋪滿后,使用恒溫?fù)u床振蕩的方式去除少突膠質(zhì)細(xì)胞;通過(guò)連續(xù)3次純化,去除神經(jīng)元。對(duì)所培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)細(xì)胞免疫熒光染色鑒定。結(jié)果采用胰蛋白酶和DNaseⅠ聯(lián)合消化后差速貼壁培養(yǎng),能夠分離獲得星形膠質(zhì)細(xì)胞。細(xì)胞具有典型的原漿型和纖維型特征,原漿型呈多角狀,突起少而粗壯;纖維型突起豐富且向外鋪展開(kāi);細(xì)胞免疫熒光結(jié)果顯示GFAP表達(dá)陽(yáng)性,且純度可達(dá)到95%。結(jié)論成功建立了樹(shù)鼩的脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞的體外分離純化培養(yǎng)方法。