摘要：旨在了解豬Nrf2基因的結(jié)構(gòu)和功能,研究Nrf2基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制。本研究選取6頭90 kg左右的健康大蒲蓮豬為試驗動物,采用cDNA末端快速克隆技術(shù)(RACE)和染色體步移技術(shù)獲得大蒲蓮豬Nrf2基因完整的cDNA序列和啟動子區(qū)域,利用生物信息學(xué)軟件分析Nrf2基因及其啟動子區(qū)域的生物學(xué)特征。結(jié)果,Nrf2基因cDNA全長2 358 bp,包括87 bp的5′UTR,495 bp的3′UTR序列,CDS區(qū)大小為1 776 bp,編碼591個氨基酸。對預(yù)測蛋白質(zhì)序列進行生物信息學(xué)分析,蛋白分子量為66.402 7 ku,理論等電點(pI)為4.66,大部分二級結(jié)構(gòu)為α-螺旋。采用染色體步移技術(shù)擴增得到5′側(cè)翼序列2 091 bp的片段。Nrf2基因5′側(cè)翼區(qū)經(jīng)預(yù)測含有典型的TATA-box,不含CpG島。構(gòu)建不同長度啟動子片段的pGL3-Basic表達載體,轉(zhuǎn)染293T細胞后經(jīng)雙熒光素酶活性檢測,提示在-903~-710 bp區(qū)域內(nèi)可能存在正調(diào)控區(qū)或增強子,生物信息學(xué)預(yù)測其中含有多個轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點,可能參與Nrf2基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控。本研究成功獲得了Nrf2基因完整的cDNA序列和啟動子區(qū)域,并且發(fā)現(xiàn)-903~-710 bp為核心啟動子,本研究為豬抗氧化應(yīng)激的遺傳改良提供一定理論基礎(chǔ)。