摘要：【目的】發(fā)掘并鑒定枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)Bs916生物膜形成調(diào)控新基因,檢測(cè)其對(duì)Bs916生物膜形成能力和對(duì)水稻紋枯病防治效果的影響?！痉椒ā坷没蛲粗亟M技術(shù)構(gòu)建fliZ基因位點(diǎn)的單敲除突變株,通過(guò)干重分析法來(lái)驗(yàn)證其生物膜形成的缺陷;利用平板對(duì)峙試驗(yàn)檢測(cè)fliZ突變株和Bs916對(duì)水稻紋枯病菌(Rhizoctonia solani)的抑菌效果;利用高效液相色譜(HPLC)檢測(cè)fliZ突變株和Bs916中影響防治效果的3種脂肽類(lèi)抗生素表面活性素、桿菌霉素L和泛革素的相對(duì)產(chǎn)量;利用綠色熒光標(biāo)記技術(shù)構(gòu)建Bs916與fliZ突變株的GFP標(biāo)記菌株,觀察兩者在水稻莖稈定殖能力變化;檢測(cè)fliZ突變株和Bs916對(duì)水稻紋枯病的防治效果?！窘Y(jié)果】成功構(gòu)建了fliZ位點(diǎn)單敲除突變株,與對(duì)照組Bs916的三維立體結(jié)構(gòu)生物膜相比僅能形成平面二維結(jié)構(gòu)生物膜,呈現(xiàn)破碎狀態(tài),證明其生物膜形成存在顯著缺陷;對(duì)生物膜干重進(jìn)行定量分析發(fā)現(xiàn)fliZ突變株生物膜干重僅為對(duì)照組Bs916的23%,進(jìn)一步驗(yàn)證了fliZ突變株生物膜形成能力顯著下降;游動(dòng)性試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)fliZ突變株菌體擴(kuò)展直徑僅為Bs916的32%,證明fliZ突變株的游動(dòng)能力顯著下降;抑菌試驗(yàn)顯示兩者抑菌帶寬基本一致,證明fliZ突變株對(duì)水稻紋枯病菌的抑菌能力與Bs916相比無(wú)顯著差異;成功檢測(cè)了fliZ突變株和Bs916合成的3種脂肽類(lèi)抗生素表面活性素、桿菌霉素L和泛革素的相對(duì)產(chǎn)量,fliZ突變株中桿菌霉素L相對(duì)產(chǎn)量顯著增加1倍,而表面活性素和泛革素相對(duì)產(chǎn)量與Bs916相比無(wú)顯著差異;水稻莖稈定殖試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)fliZ突變株菌體數(shù)量顯著低于Bs916,在水稻紋枯病病斑附近不出現(xiàn)顯著的聚集效應(yīng),呈現(xiàn)無(wú)序分布狀態(tài),證明fliZ突變株與Bs916相比在水稻莖稈上的定殖能力顯著下降;對(duì)水稻紋枯病的田間防治效果試驗(yàn)顯示,fliZ突變株第6-15天防治效果介于6.0%-20.7%,顯著低于Bs916的36.0%-57.6%,證明fliZ?