摘要：試驗旨在對新疆綿羊腦炎臨床分離株LM90SB2單增李斯特菌llsB基因進(jìn)行克隆及生物信息學(xué)分析,以期進(jìn)一步完善單增李斯特菌溶血素S的功能研究。根據(jù)GenBank中單增李斯特菌F2365基因全長序列(登錄號為:AE017262)設(shè)計其特異性引物,利用PCR方法對新疆分離株LM90SB2的llsB基因進(jìn)行擴(kuò)增,回收目的基因與pMD19-T載體連接,采用PCR、雙酶切鑒定篩選陽性菌并進(jìn)行測序,對所獲序列進(jìn)行同源性比對及遺傳變異分析。結(jié)果顯示,新疆分離株LM90SB2的llsB基因序列全長為876 bp,共編碼291個氨基酸;LM90SB2分離株llsB基因核苷酸序列與10-0809、81-0592、81-0558、02-1792、NTSN、02-1289不同分離株同源性均為100%,與CIIMS-PH-1、NRRLB-57603株的同源性均為99.9%,與J1816、R2-502株的同源性為44.7%~45.0%。分子進(jìn)化樹顯示,LM90SB2菌株llsB基因與血清型為4b的菌株親緣關(guān)系較近,聚類為同一分支。蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)預(yù)測表明,LM90SB2 llsB蛋白為親水性蛋白,無信號肽,不形成跨膜結(jié)構(gòu)。本試驗成功克隆了LM90SB2株llsB基因,為深入探討該基因功能提供全面的理論依據(jù)。