摘要：目的建立可進(jìn)行條件性敲除X-盒結(jié)合蛋白1(Xbp1)基因的flox雜合子小鼠。方法通過ET-clone的方法構(gòu)建基于cre-loxp系統(tǒng)和FLP-frt系統(tǒng)的條件性基因打靶載體。載體線性化后電轉(zhuǎn)JM8A3 ES細(xì)胞,經(jīng)G418和Ganc篩選獲得抗性ES細(xì)胞克隆。經(jīng)長片段PCR鑒定獲得正確同源重組的陽性克隆。陽性ES細(xì)胞經(jīng)克隆擴(kuò)增后,注射入C57BL/6J小鼠的囊胚中,獲得嵌合鼠,篩選出高比例嵌合小鼠與野生型C57BL/6J小鼠交配后獲得陽性F1代小鼠,并分別進(jìn)行PCR和測序鑒定。結(jié)果成功構(gòu)建打靶載體,共獲得144個(gè)抗性ES細(xì)胞,克隆經(jīng)長片段PCR鑒定,共獲得4個(gè)正確同源重組的陽性克隆。獲得4只陽性F1代小鼠,經(jīng)測序鑒定正確。Xbp1基因flox雜合子小鼠表型無明顯異常。結(jié)論成功構(gòu)建了條件性敲除Xbp1基因的flox雜合子小鼠,為未來研究器官或組織特異性的Xbp1生物學(xué)作用奠定了基礎(chǔ)。