摘要：目的部分純化傘枝犁頭霉分泌的毒力因子，并研究其誘導(dǎo)人血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的機(jī)制。方法用ConALectin親和層析法純化傘枝犁頭霉分泌的糖蛋白，并在流式細(xì)胞儀下檢測(cè)不同蛋白成分對(duì)人血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響。用變性和非變性法去除傘枝犁頭霉糖蛋白的糖基，并分別檢測(cè)其蛋白和寡糖成分誘導(dǎo)凋亡的活性。Westernblot法分析傘枝犁頭霉糖蛋白誘導(dǎo)人血管內(nèi)皮細(xì)胞caspase激酶活化情況。用caspase抑制劑檢測(cè)caspase一8和-9在凋亡反應(yīng)中的作用。XTT法檢測(cè)caspase抑制劑能否終止細(xì)胞存活率的抑制。結(jié)果流式細(xì)胞儀分析顯示傘枝犁頭霉分泌的總蛋白和糖蛋白能以劑量依賴的方式誘導(dǎo)人血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，而非糖蛋白則無此活性。純化的去糖基化蛋白和寡糖成分都不能獨(dú)立誘導(dǎo)人血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡。在凋亡信號(hào)傳導(dǎo)途徑中，caspase-9、-3和細(xì)胞色素C顯著活化，而caspase-8未見活化。Caspase-9抑制劑能夠終止傘枝犁頭霉糖蛋白誘導(dǎo)的凋亡反應(yīng)，而caspase－8抑制劑則無此效應(yīng)。Caspase-9和-3抑制劑終止了人血管內(nèi)皮細(xì)胞活性下降。結(jié)論傘枝犁頭霉分泌的糖蛋白具有誘導(dǎo)人血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的活性。糖蛋白結(jié)構(gòu)的完整性對(duì)其誘導(dǎo)凋亡的活性是必需的。內(nèi)源性凋亡信號(hào)傳導(dǎo)途徑介導(dǎo)了傘枝犁頭霉糖蛋白誘導(dǎo)的凋亡反應(yīng)。